材料與方法

  1、試驗(yàn)材料

  2012年6月至2013年5月，在中國林業(yè)科學(xué)研究院亞熱帶林業(yè)實(shí)驗(yàn)中心年珠林場林下經(jīng)濟(jì)植物栽培實(shí)驗(yàn)基地挖取多花黃精，切取根莖芽，參考周新華等人對外植體的滅菌處理方法，將消毒后的根莖芽接種在MS培養(yǎng)基上進(jìn)行初代培養(yǎng)。培養(yǎng)約45d后，選擇初代培養(yǎng)的生長健壯的無菌苗作為試驗(yàn)材料。

  2、試驗(yàn)方法

  2.1、外植體的采集時間對無菌苗增殖的影響試驗(yàn)

  選取分別于11～12、1～2、3～4、5～6、7～8和9～10月等6個時段采集的外植體初代培養(yǎng)后生長健壯的的無菌苗作為試驗(yàn)材料，就外植體采集的不同時間對其腋芽增殖培養(yǎng)的影響情況進(jìn)行了試驗(yàn)，每個處理重復(fù)3次。將不同時間采集的外植體初代培養(yǎng)后生長健壯的無菌苗接種在不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基MS+NAA1.5mg·L-1+KT1.5mg·L-1中，培養(yǎng)45d后觀察并統(tǒng)計其萌芽情況和萌發(fā)芽數(shù)，并按如下公式計算平均萌發(fā)芽數(shù)：

  平均萌發(fā)芽數(shù)=萌發(fā)的總芽數(shù)/接種的瓶數(shù)。

  2.2、增殖時間及切分方式對無菌苗增殖的影響試驗(yàn)

  以初代培養(yǎng)后生長健壯的無菌苗為試驗(yàn)材料，將根莖芽分別切成1、2、3份的無菌塊莖，分別以切分處理Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ來表示，并將其分別接種在MS+NAA1.5mg·L-1+KT1.5mg·L-1的培養(yǎng)基中，共計3個處理，每個處理接種20瓶，重復(fù)3次，分別于接種后的第25、35、45、55、65天觀察無菌苗的增殖情況，統(tǒng)計其萌發(fā)芽數(shù)，亦按如下公式計算平均萌發(fā)芽數(shù)：

  平均萌發(fā)芽數(shù)=萌發(fā)的總芽數(shù)/接種的瓶數(shù)。

  2.3、繼代培養(yǎng)次數(shù)對無菌苗增殖和生根的影響試驗(yàn)

  從初代培養(yǎng)后生長健壯的無菌苗上切取1個腋芽作為第1次繼代培養(yǎng)的試驗(yàn)材料，其后每次繼代培養(yǎng)的試驗(yàn)材料均為其上一次繼代培養(yǎng)的增殖腋芽，每次繼代培養(yǎng)均將供試腋芽接種在MS+NAA1.5mg·L-1+KT1.5mg·L-1培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，共進(jìn)行了7次繼代培養(yǎng)，每隔45d完成1次繼代培養(yǎng)，每個處理接種20瓶，重復(fù)3次，每次繼代培養(yǎng)結(jié)束末期觀察并統(tǒng)計其萌芽情況和萌發(fā)芽數(shù)，均按如下公式計算平均萌發(fā)芽數(shù)：

  平均萌發(fā)芽數(shù)=萌發(fā)的總芽數(shù)/接種的瓶數(shù)。

  以每一次繼代培養(yǎng)后的無菌苗作為試驗(yàn)材料進(jìn)行生根試驗(yàn)，每個處理重復(fù)3次。將每一次繼代培養(yǎng)結(jié)束后的無菌苗均接種在1/2MS+NAA1.0mg·L-1的生根培養(yǎng)基中，培養(yǎng)45d后觀察其生根情況，并統(tǒng)計每個處理相應(yīng)的生根數(shù)和生根率。

  生根率=生根瓶數(shù)/接種總瓶數(shù);

  平均生根數(shù)=生根總條數(shù)/生根瓶數(shù)。

  2.4、添加劑對其無菌苗增殖和生根的影響試驗(yàn)

  在增殖和生根培養(yǎng)基中分別添加濃度為0.05、0.10、0.20、0.40和0.50g·L-1的活性炭，共計5個處理，每個處理接種20瓶，重復(fù)3次，培養(yǎng)45d后觀察其組培苗增殖和生根情況，并統(tǒng)并計算平均萌發(fā)芽數(shù)、生根數(shù)和生根率。

  平均萌發(fā)芽數(shù)=萌發(fā)的總芽數(shù)/接種的瓶數(shù);

  生根率=生根瓶數(shù)/接種總瓶數(shù);

  平均生根數(shù)=生根總條數(shù)/生根瓶數(shù)。

3、培養(yǎng)條件

  在以上各試驗(yàn)的培養(yǎng)基中均添加瓊脂6.1g·L-1，蔗糖30g·L-1，將培養(yǎng)基的pH值均調(diào)節(jié)為5.8，并將培養(yǎng)基置于121℃下高壓滅菌17min;以上試驗(yàn)均在培養(yǎng)溫度為(24±2)℃、光照強(qiáng)度控制在1500～2000lx的范圍內(nèi)、每天光照時間12h、濕度控制在70%左右的環(huán)境中進(jìn)行。

  4、數(shù)據(jù)處理

  采用SPSS18.0統(tǒng)計分析軟件進(jìn)行方差分析和多重比較。多重比較采用顯著系數(shù)為0.05的Duncan多范圍檢驗(yàn)方法，所有檢驗(yàn)數(shù)據(jù)都在同一量綱上進(jìn)行分析。