2 我國(guó)櫸樹(shù)組培快繁技術(shù)研究現(xiàn)狀

  2.1 外植體的選擇和消毒時(shí)間對(duì)組培快繁影響的研究

  如何選擇外植體以及外植體的消毒方式對(duì)櫸樹(shù)的組培快繁來(lái)說(shuō)非常重要。不同的外植體類(lèi)型、采樣時(shí)間和消毒方式都會(huì)影響櫸樹(shù)組織培養(yǎng)的結(jié)果。曾用大葉櫸未成熟胚以及種子的子葉、胚軸、頂芽、嫩枝葉片和莖段等不同外植體，對(duì)影響愈傷組織誘導(dǎo)及繼代培養(yǎng)的因素進(jìn)行了探討，結(jié)果表明：不同外植體的愈傷組織誘導(dǎo)能力存在一定差異，其誘導(dǎo)率按由低到高的順序排列依次為子葉、胚軸、葉片、莖段和頂芽。選擇初春已展葉的新芽、秋季抽梢萌發(fā)的秋芽、當(dāng)年生幼嫩帶芽莖段，對(duì)黃色品系櫸樹(shù)不同外植體誘導(dǎo)不定芽發(fā)生進(jìn)行了研究，結(jié)果表明進(jìn)行其芽誘導(dǎo)培養(yǎng)最適合的外植體是當(dāng)年生枝條的帶芽莖段。通過(guò)選擇成年大葉櫸的腋芽、莖段和葉片以及實(shí)生幼苗大葉櫸的頂芽、莖段、葉片，研究了不同外植體對(duì)其組織培養(yǎng)的影響，結(jié)果表明，成年型外植體的愈傷組織誘導(dǎo)率明顯低于幼年型外植體;不同類(lèi)型的幼年型外植體誘導(dǎo)率也不同,按大小排序依次為:頂芽>莖段>葉片。

  以當(dāng)年生帶芽莖段為外植體材料，分別于4月中旬、8月中旬和12月中旬進(jìn)行取材，進(jìn)行不同取材時(shí)間對(duì)芽誘導(dǎo)的影響實(shí)驗(yàn)。結(jié)果表明：4月是櫸樹(shù)較適宜的外植體采集時(shí)間，76.67%的外植體材料萌芽，組織培養(yǎng)成功率較高。]分別于3月、5月、8月、11月進(jìn)行取材,在相同培養(yǎng)基、培養(yǎng)時(shí)間和培養(yǎng)條件下進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)，研究了不同采樣時(shí)間對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)的影響。結(jié)果表明：3月是大葉櫸很好的采樣時(shí)期,愈傷組織誘導(dǎo)率最高,為95.8%,污染率最低,為3%,且生長(zhǎng)良好。

  分別研究了不同消毒時(shí)間對(duì)櫸樹(shù)組織培養(yǎng)的影響。羅雪梅認(rèn)為，帶芽莖段進(jìn)行芽誘導(dǎo)試驗(yàn)中，消毒效果很好的方法是70%酒精30 s與0.1%升汞消毒3 min。汪靈丹認(rèn)為，70%酒精30 s與0.1%升汞8～10 min左右,基本上能達(dá)到較好的消毒效果。

  2.2 培養(yǎng)基和激素種類(lèi)對(duì)組培快繁影響的研究

  適宜的基本培養(yǎng)基和植物激素是櫸樹(shù)組培技術(shù)能否成功的關(guān)鍵,基本培養(yǎng)基和植物激素不同,組培快繁的結(jié)果也不盡相同。用經(jīng)常規(guī)消毒的成年櫸樹(shù)當(dāng)年生嫩枝，接種于附加不同質(zhì)量濃度的激素BA、NAA、2,4-D的MS的培養(yǎng)基上，誘導(dǎo)莖尖萌芽。其研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)：MS+BA(1.0 mg/L)為誘導(dǎo)芽萌發(fā)的最適宜培養(yǎng)基, MS+BA(0.5 mg/L)+CH(500 mg/L)為最適壯苗培養(yǎng)基, 1/2MS+IBA(0.5 mg/L)為最適生根培養(yǎng)基。用頂芽作為外植體，就不同培養(yǎng)基和激素濃度對(duì)芽體的誘導(dǎo)、增殖系數(shù)的影響等方面進(jìn)行試驗(yàn)研究，其結(jié)果表明：頂芽萌芽和增殖培養(yǎng)均受到不同培養(yǎng)基和激素濃度的影響，其中WPM+BA(1.0 mg/L)是很佳頂芽萌芽培養(yǎng)基,萌芽率最高可達(dá)98.3%, WPM+BA(4.0 mg/L)是很佳增殖培養(yǎng)基,很大增值系數(shù)為15。選用帶芽莖段為外植體材料進(jìn)行櫸樹(shù)組培快繁研究，其研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)：誘導(dǎo)芽萌發(fā)的最適宜的培養(yǎng)基為MS+BA(0.5 mg/L)或MS+BA(1.0 mg/L),增殖培養(yǎng)基是MS+BA(0.5 mg/L)，壯苗培養(yǎng)基為MS+BA(0.5 mg/L)+0.5GA3(500 mg/L),生根培養(yǎng)基為1/2 MS+NAA(0.5 mg/L)+活性炭0.1 g/L。劉雪梅等[11]以當(dāng)年生帶芽莖段為外植體材料,進(jìn)行了櫸樹(shù)不定芽的直接誘導(dǎo)試驗(yàn).結(jié)果表明: MS+BA (2.25～4.50μmol/L)為適合的不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基,有效芽誘導(dǎo)率達(dá)到76.67%;MS+BA (2.25 μmol/L)為最適繼代增殖培養(yǎng)基,增殖系數(shù)為5.1;MS+BA (2.25 μmol/L)+GA3(1.45μmol/L)為最適壯苗培養(yǎng)基;1/2 MS+NAA(2.69 μmol/L)+活性炭0.1 g/L為最適生根培養(yǎng)基,生根率和生根數(shù)分別達(dá)到77.78%與4.5條.

  3 櫸樹(shù)組培快繁技術(shù)的發(fā)展趨勢(shì)

  雖然我國(guó)櫸樹(shù)的組織培養(yǎng)已經(jīng)在實(shí)驗(yàn)室取得了初步成功，但仍面臨諸多問(wèn)題，如相應(yīng)投資大，成本高， 技術(shù)性強(qiáng)，需有溫室等一系列配套設(shè)施等，因此真正應(yīng)用于工廠化生產(chǎn)還有待進(jìn)一步的研究。①為適應(yīng)生產(chǎn)的需要，可以進(jìn)一步擴(kuò)大櫸樹(shù)優(yōu)良品系(種)的外植體的篩選范圍，以培育出更多優(yōu)良品種的櫸樹(shù)組培苗。②進(jìn)行櫸樹(shù)不同品系的組織培養(yǎng)，以探討不同櫸樹(shù)品系在組培快繁關(guān)鍵技術(shù)等方面的差異顯著性。③在櫸樹(shù)的生理生化和分子機(jī)制等方面加強(qiáng)基礎(chǔ)理論研究，這些問(wèn)題的突破將會(huì)有利于櫸樹(shù)樹(shù)種的改良。④為了使櫸樹(shù)組織培養(yǎng)技術(shù)盡快應(yīng)用到實(shí)際的生產(chǎn)中，要進(jìn)一步簡(jiǎn)化、優(yōu)化培養(yǎng)程序，降低成本。盡管目前櫸樹(shù)組培快繁技術(shù)的工廠化應(yīng)用是比較困難的,但是隨著生物技術(shù)及其手段的不斷發(fā)展,櫸樹(shù)的組織培養(yǎng)工廠化快速繁殖生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)櫸樹(shù)苗木已指日可待。