2、體細(xì)胞胚誘導(dǎo)

  體細(xì)胞胚誘導(dǎo)是指在植物組織培養(yǎng)中，以植物組織、器官或原生質(zhì)體等為外植體，經(jīng)過特定的培養(yǎng)條件，組織細(xì)胞脫分化形成快速生長分裂的細(xì)胞團(tuán)，即愈傷組織。然后愈傷組織進(jìn)一步生長分化，再分化成具有與合子胚一樣能夠發(fā)育成完整植株的無性胚狀體結(jié)構(gòu)，稱為體細(xì)胞胚。

  在木本植物組織培養(yǎng)的研究中，大多數(shù)的木本植物都是需要通過體細(xì)胞胚誘導(dǎo)來完成植株的再生。況且誘導(dǎo)體細(xì)胞胚能夠極大地發(fā)揮植物細(xì)胞的再生分化潛力，在荔枝、龍眼與蘋果等果樹的組織培養(yǎng)中，通過大量增殖愈傷組織，能夠誘導(dǎo)獲得大量體細(xì)胞胚，每個體細(xì)胞胚都具有發(fā)育成完整植株的潛力，并且可以將這些體細(xì)胞胚制作成人工種子，做到對優(yōu)良種苗資源的高效繁育，蘊(yùn)含著極大的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。但大量木本植物的體細(xì)胞胚誘導(dǎo)，存在體細(xì)胞胚誘導(dǎo)困難與誘導(dǎo)體細(xì)胞胚不正常的問題，這是制約木本植物組織培養(yǎng)技術(shù)發(fā)展的瓶頸。

  體細(xì)胞胚誘導(dǎo)除了與上述外植體、植物激素、培養(yǎng)條件等有著密切的關(guān)系，植物的基因型也是一個重要的影響因素。在一種植物的不同品種中，各個品種的體細(xì)胞胚發(fā)生能力不同。體細(xì)胞胚誘導(dǎo)很大程度上取決于愈傷組織的胚性，胚性強(qiáng)的愈傷組織能夠自發(fā)地分化成高質(zhì)量的體細(xì)胞胚。因此，選用分生能力旺盛的外植體，在適宜的培養(yǎng)條件與激素條件下，獲得并保持高胚性的愈傷組織，是體細(xì)胞胚誘導(dǎo)的關(guān)鍵。并且體細(xì)胞胚誘導(dǎo)在基因轉(zhuǎn)化技術(shù)發(fā)展方面，能夠提供良好的物質(zhì)基礎(chǔ)。

  3、體細(xì)胞胚再生

  體細(xì)胞胚再生是指體細(xì)胞胚經(jīng)歷類似合子胚發(fā)育過程，進(jìn)一步發(fā)育成完整植株的階段。這是植物組織培養(yǎng)技術(shù)中最關(guān)鍵的一步，之前對所有因素的探索，都是為了能夠獲得再生植株。在體細(xì)胞胚再生過程中，大多數(shù)學(xué)者會將培養(yǎng)基中的基本元素與營養(yǎng)物質(zhì)減半，或不添加任何的植物激素，以充分發(fā)揮體細(xì)胞胚自身的分化能力 。因此，獲得高質(zhì)量的體細(xì)胞胚是植株再生成功很重要的關(guān)鍵。

  從外植體誘導(dǎo)獲得愈傷組織，愈傷組織再進(jìn)行體細(xì)胞胚發(fā)生，最后體細(xì)胞胚經(jīng)過生長萌發(fā)成擁有根、莖、葉的完整植株，此過程都是在無菌培養(yǎng)條件下進(jìn)行的異養(yǎng)培養(yǎng)。而再生植株最終是需要進(jìn)行移栽，自我生長成正常的種苗。從異養(yǎng)到自養(yǎng)的過程中，再生植株需要經(jīng)歷一個適應(yīng)階段，不同植物品種的適應(yīng)能力不同，導(dǎo)致移栽成活的難易程度不一。

  4、再生植株移栽

  再生植株的根系、葉片與莖段等植物器官對于移栽成功十分重要。開瓶煉苗是植株移栽過程中的過渡階段，目的在于讓再生苗預(yù)先適應(yīng)外部環(huán)境，光照強(qiáng)度不宜過強(qiáng)，以保護(hù)新生的葉片，且避免過強(qiáng)的蒸騰作用，造成葉片萎蔫，使再生苗脫水死亡。而根系中的側(cè)根是植株能夠從土壤中吸取養(yǎng)分的最重要組織器官，因此誘導(dǎo)再生植株長出側(cè)根發(fā)達(dá)的根系對于移栽成活至關(guān)重要。