外植體的選取、滅菌和接種

  用于快繁的外植體很多，如莖段、側(cè)芽、葉、花序梗、花序軸、花蕾等，下面以莖尖和莖段、花序軸、花蕾為外植體說(shuō)明。

  A)選取無(wú)病蟲(chóng)害、粗壯的莖尖和莖段，要求葉密莖粗，以利于將來(lái)分化迅速，無(wú)性系后代質(zhì)量好。選莖尖時(shí)嫩葉不要去掉太多，以免傷口面過(guò)多，過(guò)多的葉可在滅菌后、接種之前除去。選莖段時(shí)先除去葉，留一段葉柄，滅菌水洗后，將莖段面及葉柄再切出新茬。接種時(shí)注意極性，尤其是莖尖不可倒置或側(cè)植。

  B)花序軸應(yīng)選取具該品種典型特征的、飽滿充實(shí)的蕾，很好要開(kāi)放而未開(kāi)放的花蕾，這時(shí)花瓣外有一層薄膜包圍，里面潔凈無(wú)菌，采后便于表面滅菌。過(guò)于幼嫩的花蕾，不便滅菌和剝離。

  C)取花蕾時(shí)在取材前2-3周，很好把母株置于溫室內(nèi)培養(yǎng)，不澆水，在接種前選擇直徑4～6毫米的花蕾剪下，常規(guī)消毒。將已經(jīng)滅菌的花蕾縱切成大致相等的4～6小塊，然后接種到芽誘導(dǎo)培養(yǎng)上，MS+BA0.1,經(jīng)過(guò)10～15天的培養(yǎng)，外植體就會(huì)形成愈傷組織。再經(jīng)過(guò)20～30天的培養(yǎng)，愈傷組織分化出較多的叢生芽，這時(shí)就可將其分割成數(shù)塊繼代培養(yǎng)，配方同誘導(dǎo)培養(yǎng)基。

  培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件

  適用于菊花的培養(yǎng)基種類很多，如MS、B5、N5、white等等。但大多采用MS培養(yǎng)基，添加6-BA 2～3mg/l，NAA 0.02～0.2mg/l。菊花對(duì)激素的要求并不是很嚴(yán)格的，適用的范圍很廣。菊花試管培養(yǎng)的溫度范圍較寬，22～28℃都可以，以24～26℃很好。培養(yǎng)室光照時(shí)每天12～16小時(shí)為宜，光強(qiáng)1000～4000lx較好。

  繼代培養(yǎng)

  外植體經(jīng)培養(yǎng)后，一般經(jīng)4～6周，莖尖直接分化出新芽，或經(jīng)愈傷組織分化出新芽;莖段、花序軸側(cè)芽萌發(fā)，可產(chǎn)生1～ 數(shù)個(gè)芽。最初分化率及分化數(shù)量都較少，但隨繼代次數(shù)增加。增殖方式除誘導(dǎo)叢生芽增殖外，也可用莖切段作微型扦插繁殖。叢芽增殖時(shí)，將芽叢切或小塊，轉(zhuǎn)到分化培養(yǎng)基中即可。微型扦插則以嫩莖梢作材料，將嫩梢剪成1節(jié)帶1葉的莖段。然后將切段基部插入MS0或MS+NAA0.1的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，4～5周后，腋芽即生長(zhǎng)成小植株，再照上述方法切剪莖段，重復(fù)培養(yǎng)。

  生根和移栽

  菊花無(wú)根苗生根一般較容易，通常在增殖培養(yǎng)上久不轉(zhuǎn)瓶，即可生根，但這種根的根毛較少或無(wú)，不利將來(lái)移栽和生長(zhǎng)，所以常用下列方法處理：

  一是無(wú)根苗的試管生根 切取3cm左右無(wú)根嫩莖，轉(zhuǎn)插到1/2MS+NAA(或IBA)0.1的培養(yǎng)基中，經(jīng)兩周即可生根。然后再進(jìn)行移栽馴化，移栽初期保持高濕度條件，營(yíng)養(yǎng)缽基質(zhì)澆透水，取出生根的試管苗，洗掉附著在根部的培養(yǎng)基，用竹簽在基質(zhì)上打一小孔，將幼苗插入基質(zhì)中。然后加設(shè)小拱棚以保濕，隨著幼苗的生長(zhǎng)，逐漸降低空氣濕度和基質(zhì)含水量，轉(zhuǎn)為正常苗的管理階段。

  二是無(wú)根嫩莖直接插植到基質(zhì)中生根。利用菊花嫩莖易于生根的特點(diǎn)，可免去試管生根一道之序。剪取2～3cm無(wú)根苗，插植到珍珠巖或蛭石的基質(zhì)中，基質(zhì)事先用生根激素溶液浸透，10天后生根率可達(dá)95～100%。

  菊花用組織培養(yǎng)快速繁殖，一般4～6周為一個(gè)周期，增殖倍率均在5～10倍以上。若以5倍計(jì)算，平均以40天為一個(gè)周期，一年可獲得100～900萬(wàn)株苗，比常規(guī)繁殖快數(shù)千倍。