金線蓮為蘭科開唇蘭屬植物，具有極高的觀賞價值和藥用價值，是我國民間一種重要的中草藥資源，在福建、臺灣等地應(yīng)用的歷史十分悠久。由于野生金線蓮的自然繁殖率較低，加上人為的大量采挖，造成國內(nèi)的野生金線蓮幾近枯絕。因此，通過人工栽培，特別是采用組織培養(yǎng)技術(shù)對金線蓮進(jìn)行繁殖，是保護(hù)其資源的有效手段。本試驗旨在尋求一條高效率、低成本、環(huán)保的規(guī)?；a(chǎn)途徑，努力為金線蓮的產(chǎn)業(yè)化提供技術(shù)保障。

  1 材料與方法

  1.1 供試材料

  福建金線蓮，采用福建漳州地區(qū)品種，組培苗。

  1.2 試驗方法

  本試驗在濮陽市農(nóng)業(yè)科學(xué)院組培實驗室進(jìn)行，采用的誘導(dǎo)、增殖基本培養(yǎng)基為MS+蔗糖30 g/L+瓊脂8 g/L，pH值5.8;促根基本培養(yǎng)基為1/2 MS+蔗糖15 g/L+瓊脂 8 g/L，pH 值 5.8。 控制溫度(25±1)℃，光照時間 8～10 h/d，光照強(qiáng)度 1 500～2 000 lx。

  1.2.1 不定芽的誘導(dǎo)和增殖 生長健壯的金線蓮，去根部、葉片后切成帶有1個腋芽或頂芽的莖段，接種到不同激素水平的MS培養(yǎng)基中培養(yǎng)，共設(shè)置8個處理(見表1)。每個處理接種10瓶，每瓶5個莖段，誘導(dǎo)過程中低光照(500～600 lx)，60 d后觀察比較不定芽誘導(dǎo)效果及增殖效果，篩選出佳的分化培養(yǎng)基。

  1.2.2 生根誘導(dǎo) 不定芽伸長至3～4 cm時，自基部切下，接種到生根培養(yǎng)基上，共設(shè)置6個處理(見表2)，每個處理接種10瓶，每瓶5個不定芽。30 d后，觀察其生根狀況，篩選出佳的生根培養(yǎng)基。

  1.2.3 組培苗移栽 幼苗在生根培養(yǎng)基上培養(yǎng)35～50 d，根長至3～4 cm時，將瓶苗搬到煉苗大棚或陰涼通風(fēng)處。經(jīng)7 d左右的適應(yīng)性煉苗，便洗苗移栽。移栽基質(zhì)為蛭石、草炭土、消毒園土按1∶1∶1的比例配制，并用l%～2%多菌靈噴淋消毒。

  2 結(jié)果與分析

  2.1 不定芽誘導(dǎo)及增殖試驗

  莖段和頂芽接種到不同激素配比培養(yǎng)基中，10～15 d后莖段葉腋處開始分化出可觀察到的乳白色的不定芽，頂芽較腋芽更容易萌動，腋芽以叢生生長為主，頂芽則以伸長生長為主。

  試驗結(jié)果表明 (見表1)，芽體的分化與6-BA、NAA濃度有密切關(guān)系，一定濃度的6-BA、NAA對莖段和頂芽有促進(jìn)分化和增殖的作用。在試驗的8個處理中，處理1、處理2、處理3和處理6的分化率均達(dá)到100%，且芽體生長狀況好，其中處理2(6-BA 2 mg/L+NAA 0.1 mg/L)增殖系數(shù)大。

  表1 不同激素濃度對不定芽分化的影響

 2.2 生根誘導(dǎo)試驗

  通過分析3個激素水平對金線蓮的促根結(jié)果可知(見表2)，當(dāng)NAA濃度為0.5 mg/L時促根效果比較好，生根率、根的數(shù)量和長度都達(dá)到較高的水平。接種到生根培養(yǎng)基后培養(yǎng)10 d左右開始生根，根從靠近培養(yǎng)基的節(jié)上長出1～3條，呈肉質(zhì)狀。根比較短且不分支，其上有細(xì)密、乳白色的根毛?；钚蕴靠梢蕴嵩缟?，提高生根率，提高根的質(zhì)量。加0.3%的活性炭可以使金線蓮的生根時間縮短3～5 d，生根率可以提高10%左右，同時可以有效地減緩根的老化。培養(yǎng)50 d左右，植株長至8 cm時可進(jìn)行室外移栽。

  表2 不同激素對生根的影響

  2.3 組培苗移栽

  煉苗后進(jìn)行洗苗移栽，移栽后的管理非常重要，每天都要觀察，及時補(bǔ)充水分及養(yǎng)分，發(fā)現(xiàn)有異常及時處理。把金線蓮移至陰涼大棚內(nèi)的專用花盆中，每盆栽植20株左右，大棚內(nèi)溫度控制在20℃～28℃，使空氣相對濕度保持在70%～80%;以后每7 d噴1次1/4MS來補(bǔ)充養(yǎng)分;如遇有猝倒病則噴施多菌靈或托布津1 000倍液，3個月培養(yǎng)期后出苗，選擇根壯葉繁的15 cm高優(yōu)良苗，采后用清水洗凈，用專用保鮮盒保藏于冰柜中或曬干成品。

  3 結(jié)論與討論

  (1)金線蓮屬陰性植物，性喜溫涼，在組培過程中，室內(nèi)溫度在23℃左右時長勢很好，當(dāng)氣溫超過28℃或低于18℃時，其生長會受抑制;而氣溫超過35℃時，會因蒸騰失水嚴(yán)重而死亡。

  (2)在不定芽誘導(dǎo)和繼代增殖前期用微光培養(yǎng)，有利于金線蓮芽的分化，在增殖后期適當(dāng)增強(qiáng)光照，會使芽體較粗壯，生根過程中加強(qiáng)光照，能提高苗的質(zhì)量。

  (3)試驗表明，一定濃度的6-BA、NAA對莖段和頂芽有促進(jìn)分化和增殖的作用。其中6-BA 1mg/L+NAA 0.1 mg/L、6-BA 2 mg/L+NAA 0.1 mg/L 處理對福建金線蓮的不定芽誘導(dǎo)效果較好，分化率均達(dá)到100%，且芽體生長狀況好。6-BA 2 mg/L+NAA 0.1 mg/L處理對福建金線蓮不定芽增殖效果好，增殖系數(shù)達(dá)到6.14。在生根培養(yǎng)中，NAA 0.5 mg/L+活性炭0.3%處理的促根效果好，生根率可達(dá)98%。